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博萊霉素的應(yīng)用領(lǐng)域你知道嗎?
點(diǎn)擊次數(shù):1107 更新時(shí)間:2021-09-25
  博來(lái)霉素(Bleomycin)與鐵的復(fù)合物嵌入DNA,引起DNA單鏈和雙鏈斷裂。不引起RNA鏈斷裂。作用的第一步是本品的二噻唑環(huán)嵌入DNA的G-C堿基對(duì)之間,同時(shí)末端三肽氨基酸的正電荷和DNA磷酸基作用,使其解鏈。作用的第二步是本品與鐵的復(fù)合物導(dǎo)致超氧或羥自由基的生成,引起DNA鏈斷裂。口服無(wú)效,需經(jīng)肌內(nèi)或靜脈注射。
  博萊霉素應(yīng)用領(lǐng)域:
  可選擇Sh ble基因表達(dá)的細(xì)胞。與現(xiàn)在使用的其他動(dòng)物細(xì)胞標(biāo)記物無(wú)交叉抗性
  因此這種抗生素可用來(lái)分離對(duì)其他篩選劑(如:慶大霉素,潮霉素)有抗性的克隆。Zeocin是一種屬于爭(zhēng)光霉素家族的糖蛋白抗生素,在體內(nèi)能作用于大多數(shù)細(xì)菌(包括E. coli)、真菌(如:酵母菌)、植物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞。
  博萊霉素溶液的配制方法:
  1. 先將使用到的所有器具高溫滅菌,儀器表面、工作臺(tái)面消毒。
  2. 在分析天平上稱取博萊霉素粉末0.500 g,加10 mL無(wú)菌水溶液溶解。
  3. 用0.2微米濾膜過(guò)濾除菌到無(wú)菌容器中,然后分裝到 1.5 mL EP管中。
  不建議使用螺旋蓋管子,容易污染。-20度保存。
  為避免污染和反復(fù)凍融,建議分裝成小規(guī)格的,如500 uL。
  博萊霉素使用辦法:
  1、液體Zeocin可用于細(xì)胞培養(yǎng)。
  2、用于篩選轉(zhuǎn)化株的Zeocin濃度根據(jù)PH值和鹽濃度改變。
  3、PH越高,鹽濃度越低Zeocin活性越大。
  4、普通大腸桿菌菌株篩選可在25 ?g/ml zeocin濃度的低鹽LB瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行,PH調(diào)至7.5 。
  5、動(dòng)物細(xì)胞篩選:根據(jù)不同細(xì)胞系從100 到 750 ?g/ml 。
  6、植物細(xì)胞篩選:根據(jù)不同的細(xì)胞種類和培養(yǎng)基從50 到 250 ?g/ml 。

滬公網(wǎng)安備 31011802001678號(hào)

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