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RAW264.7+GFP小鼠單核巨噬細胞白血病細胞綠色熒光標記
點擊次數(shù):293 更新時間:2024-07-02

RAW264.7+GFP小鼠單核巨噬細胞白血病細胞綠色熒光標記

,RAW264.7 GFP

貨號:YJ-0082a

價格: 3200.0

規(guī)格: 1*10 6

細胞描述

此細胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒,XC斑點形成試驗陰性??梢园嬛行约t并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖??梢钥贵w依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。LPSPPD處理2天可誘導分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用。

該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶GFP基因。

細胞特性

1 來源:鼠科白血病病毒誘導的腫瘤;單核細胞;巨噬細胞

2 形態(tài):不規(guī)則圓形,紡錘狀,貼壁細胞,少量懸浮。

3 含量:>1x106  細胞數(shù)

4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5 用途:僅供科研使用。

細胞篩選

該細胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GFP的細胞,隨細胞傳代次數(shù)的增加,其GFP熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度,可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。

建議收到細胞后至少傳3代,凍存留種后再進行篩選。

初次進行細胞篩選時,建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無細胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,漂浮細胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

細胞接收后的處理

1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2)請在45X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)半貼細胞或貼壁不牢(懸浮)細胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h,顯微鏡下觀察細胞的情況,若細胞密度在60%以下,客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用完全培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代,傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞離心后回收。

4備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 。

細胞培養(yǎng)步驟

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

1 準備DMEM(包含2mM L-谷氨酰胺,0.11g / L丙酮酸鈉) (推薦YJ-0001)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %P/S青霉素-鏈霉素 1%。

2 注意事項:

a)在細胞生長的初始階段,細胞以貼壁的形式生長并呈現(xiàn)出長方體的形態(tài)和有偽足"延伸。隨著培養(yǎng)時間的增加,細胞呈現(xiàn)圓形并以疊加的形式生長。細胞密度達到一定的程度,會有細胞以懸浮的方式散落到到培養(yǎng)基中,鏡下觀察會發(fā)現(xiàn)懸浮和貼壁的細胞會同時出現(xiàn)。

b)該細胞傳代時不需要用胰酶消化。傳代時,用無菌細胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細胞刮落,收集離心后重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中。(c)該細胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當細胞密度較大時,細胞會輕微脫落變圓或者許多細胞堆積在一起,有些細胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細胞是存活的,在傳代時應收集起來,離心后細胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。

d)血清質(zhì)量差異可能引起細胞貼壁能力變化,應選用高質(zhì)量的胎牛血清。

3 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

4 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二. 細胞處理

1)凍存細胞的復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達70%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞,傳代可以參考以下方法:

該細胞用細胞刮鏟替代胰酶來對細胞進行處理。用無菌細胞刮鏟刮拭細胞附著培養(yǎng)表面將細胞刮落,收集細胞后離心去上清,重懸后接種到新的裝有新鮮培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶內(nèi)。收貨后第一次傳代1:2進行,后續(xù)可以根據(jù)實際的情況以1:2~1:4的比例進行傳代。

3) 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。



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