間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化試劑盒
,成骨誘導(dǎo)液
貨號(hào)：YJ-MSCYD-002
價(jià)格： 1280.0
規(guī)格： 100ml 200ml
產(chǎn)品描述
本產(chǎn)品為團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化試劑盒，可增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的能力。
本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。
產(chǎn)品組成成分及保存
試劑名稱 | 體積（100mL規(guī)格/200mL規(guī)格） | 保存條件及有效期 |
誘導(dǎo)分化添加劑 | 5mL / 10mL | -20℃，1 Year |
優(yōu)質(zhì)胎牛血清 | 10mL / 20mL | -20℃，1 Year |
細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 85mL / 170mL | 4℃，1 Year |
茜素紅染色液 | 5mL / 10mL | RT（室溫），1 Year |
注意：1.為保證產(chǎn)品的有效性，請(qǐng)避免反復(fù)凍融。
2. 配制好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基保存于2-8℃，有效期為2周，請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量合理配制。
產(chǎn)品使用說明
1. 間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基的配制
① 室溫條件下融化添加劑及血清。（注意：若添加劑或血清中有沉淀物，屬正?，F(xiàn)象，無須過濾，避免成分丟失。）
② 根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量，于無菌操作臺(tái)中配制完全培養(yǎng)基，建議每次配制50mL，先加細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基和胎牛血清，再加誘導(dǎo)分化添加劑。（配制比例見表一）
試劑成分 | 配制比例 | 50mL配制體系 |
誘導(dǎo)分化添加劑 | 5% | 2.5mL |
優(yōu)質(zhì)胎牛血清 | 10% | 5mL |
細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 85% | 42.5mL |
表一
2. 間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)步驟
①包被細(xì)胞培養(yǎng)瓶/板：向細(xì)胞培養(yǎng)器皿中加入0.1%明膠溶液，輕微晃動(dòng)，使包被液完全覆蓋培養(yǎng)器皿底面，置于37℃培養(yǎng)箱中孵育30min，吸除液體即可使用。
②建議取第3~5代、純度達(dá)90%以上、狀態(tài)良好的間充質(zhì)干細(xì)胞，將其消化收集，使用含10%FBS的完全培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度，均勻鋪于包被好的培養(yǎng)瓶/板中，置于37℃，5%CO2，飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（細(xì)胞接種詳情參考表二）
培養(yǎng)器皿 | 底面積 | 細(xì)胞量 | 培養(yǎng)液體積 |
24孔培養(yǎng)板 | 2cm/孔 | 2×105cell/孔 | 1mL/孔 |
12孔培養(yǎng)板 | 4.5cm/孔 | 4.5×105cell/孔 | 2mL/孔 |
6孔培養(yǎng)板 | 9.6cm/孔 | 9.6×105cell/孔 | 2mL/孔 |
T25培養(yǎng)瓶 | 25cm | 25×105cell | 5mL |
6cm培養(yǎng)皿 | 21cm | 21×105cell | 5mL |
10cm培養(yǎng)皿 | 55cm | 55×105cell | 10mL |
表二
③待細(xì)胞匯合度達(dá)約90%時(shí)，即可進(jìn)行誘導(dǎo)分化。
④小心吸棄細(xì)胞培養(yǎng)上清，沿孔壁緩慢加入提前配制好的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基，置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
（注意：完全培養(yǎng)基加入細(xì)胞前需提前置于37℃預(yù)熱。）
⑤每2~3day換用新鮮的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基。換液時(shí)，若細(xì)胞培養(yǎng)上清顏色變?yōu)槌吻宓狞S色，是由于細(xì)胞量較大，營(yíng)養(yǎng)消耗較快導(dǎo)致的，請(qǐng)及時(shí)縮短換液周期。
⑥細(xì)胞誘導(dǎo)2~4周后，即可進(jìn)行茜素紅染色鑒定。（注意：請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下確認(rèn)鈣結(jié)節(jié)形成后，再進(jìn)行染色鑒定。）
3. 茜素紅染色分析
① 細(xì)胞誘導(dǎo)分化結(jié)束后，小心吸棄細(xì)胞培養(yǎng)上清，1×PBS潤(rùn)洗1~2次，室溫固定30 min。（細(xì)胞固定液為4%中性甲醛溶液等，體積參考表二）
② 吸棄細(xì)胞固定液，1×PBS潤(rùn)洗2次。沿孔壁緩慢加入茜素紅染色液，染液體積請(qǐng)參考表二，室溫染色30min。（注意：染色液底部可能會(huì)有沉淀，吸取時(shí)盡量不要觸及底部。若細(xì)胞染色后有沉淀，1×PBS洗去即可。）
③ 吸出染色液，1×PBS潤(rùn)洗，去掉浮色。顯微鏡下觀察細(xì)胞染色效果，鈣鹽呈較深的橙紅色。（注意：染色液可重復(fù)使用，建議收集。）
質(zhì)量控制
無菌檢測(cè)（細(xì)菌、真菌和支原體檢測(cè)）
pH測(cè)試
滲透壓檢測(cè)
內(nèi)毒素
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間充質(zhì)干細(xì)胞
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注意事項(xiàng)
僅限科研用。
培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。
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